Поява та виявлення цитриніну в їжі рослинного походження - PDF безкоштовно
Від Наукового центру харчування, землекористування та навколишнього середовища Мюнхенського технічного університету ім. Вейхенштефана, кафедра гігієни тварин - проф. Лікар. hc.c. Йоганн Бауер Представлений Інститутом гігієни та технології харчових продуктів тваринного походження Кафедра гігієни та технології молочного університету - проф. Ервін Мертлбауер Ветеринарний факультет Університету Людвіга Максиміліана Мюнхен Поява та виявлення цитриніну в продуктах харчування рослинного походження Інавгураційна дисертація на здобуття ветеринарної докторської частини ветеринарного факультету Університету Людвіга Максиміліана Мюнхен Клаудією Барбарою Шнайдер з Мюнхена Мюнхен 2007
Надруковано з дозволу ветеринарного факультету Мюнхенського університету імені Людвіга-Максиміліана. Декан: Доповідач: співреферент: Університет-Проф. Лікар. E. P. Märtlbauer Проф. Мертльбауер черв. День випуску Deeg: 9 лютого 2007 р
Мій чоловік і дві мої дочки
Сторінка I Зміст Вступ. 1 Б література. 3 1 Фізичні та хімічні властивості цитриніну. 3 2 Гриби, що виробляють цитринін. 5 3 Поява цитриніну. 7 4 Токсикокінетика. 9 5 Біологічні властивості цитриніну. 10 5.1 Вплив на мікроорганізми. 10 5.2 Вплив на макроорганізми та клітинні системи. 10 5.2.1 Цитотоксичність. 11 5.2.2 Нефротоксичність. 12 5.2.3 Генотоксичність. 15 5.2.4 Канцерогенність. 16 5.2.5 Ембріотоксичні та тератогенні ефекти. 17 5.2.6 Комбіновані ефекти з іншими мікотоксинами. 17 5.3 Фармакологічні властивості. 18 6 Спосіб виявлення цитриніну. 19 С Матеріал та методи. 20 1 матеріал. 20 1.1 Зразок матеріалу. 20 1.2 Витратні матеріали. 21 1.3 Витратні матеріали. 21 1.4 Хімічні речовини. 22 2 методи. 22 2.1 Розробка методу визначення цитриніну в злаках. 23 2.1.1 Попередні випробування для вилучення. 2.1.2 Попередні випробування для очищення. 24 2.1.2.1 Поділ рідина-рідина. 2.1.2.2 Очищення за допомогою твердофазної екстракції. 30 2.1.2.3 Очищення за допомогою імуноафінної хроматографії. 33 2.2 Розробка методів визначення цитриніну у фруктових та овочевих соках. 34
Сторінка II 2.3 Орієнтаційні дослідження стабільності цитриніну у фруктових соках 38 2.4 Визначення цитриніну в азіатських продуктах харчування. 38 2.5 Перевірка методів. 39 2.6 Мас-спектрометричне визначення цитриніну. 41 2.6.1 LC-MS аналіз злаків. 41 2.6.2 LC-MS/MS аналіз фруктових та овочевих соків, а також азіатських продуктів. 42 2.7 Експертиза комерційних зразків. Результати 43 D. 45 1 Виявлення та визначення цитриніну за допомогою ESI-MS або MS/MS. 45 2 попередні експерименти для визначення цитриніну в органічних матрицях. 48 2.1 Зернові культури. 48 2.1.1 Видобуток. 48 2.1.2 Очищення. 49 2.1.2.1 Розділення рідина-рідина. 49 2.1.2.2 Очищення за допомогою твердофазної екстракції. 52 2.1.2.3 Очищення за допомогою иммуноаффинных колон. 54 2.2 Фруктові та овочеві соки. 55 2.2.1 Результати попередніх випробувань. 55 2.2.2 Попередні дослідження стабільності цитриніну в яблучному соку. 57 2.3 Валідація методу. 58 3 Поява цитриніну в їжі. 61 3.1 Зернові культури. 61 3.2 Фруктові та овочеві соки. 62 3.3 Азіатська їжа. 62 Е дискусія. 63 F резюме. 68 Г Резюме. 69 Н Бібліографія. 70
Сторінка III Перелік рисунків: Рисунок 1: Структурна формула цитриніну, A) p-хінонової форми та B) о-хінонової форми . 3 Рисунок 2: LC-MS хроматограми (m/z 251) стандартного розчину (5 нг/мл, вище) та зразок кукурудзяної муки, що містить цитринін (4,4 мкг/кг, нижче). 46 Рисунок 3: Мас-спектр цитриніну (ESI +, напруга конуса 30 В). 46 Рисунок 4: LC-MS/MS хроматограми (m/z 249/175) стандартного розчину (1 нг/мл, вище) та зразок яблучного соку, штучно забруднений цитриніном (c: 0,1 нг/мл, нижче). 47 Рисунок 5: Поведінка цитриніну в яблучному соку при кімнатній температурі. 58
Сторінка VI Список абревіатур aw значення води активність води БЕН Балкан Ендемічна нефропатія Клітини BHK21 Клітини Babyhamster клітини CHO-K1 Клітини яєчника китайського хом'ячка ДНК Дезоксирибонуклеїнова кислота (DNS: Деоксарибонуклеїнова кислота) EIA Імуноферментний аналіз (ферментний імунологічний аналіз) g прискорення через силу тяжіння (1g = 9,81 м 2) г грамів HCl соляної кислоти Hela клітини Клітини карциноми шийки матки Клітини HEK293 Клітини ембріональної нирки людини Клітини HL-60 Клітини промієлоцитарного лейкозу людини ВЕРХ Високопродуктивна рідинна хроматографія HPRT Гіпоксантин-гуанін-фосфорибозил-трансфераза HTC-клітини Гепатома клітини тканини IAC Імуноферментація Міжнародне агентство з досліджень раку IARC ім внутрішньом’язово внутрішньом'язово внутрішньочеревно внутрішньовенно внутрішньовенно, кг кілограм маси тіла LC-MS рідинна хроматографія-мас-спектрометрія LC-MS/MS рідинна хроматографія-тандемна мас-спектрометрія LD letaldose LLC-PK1 Свинячі ниркові клітинні лінії MDBK клітини Madin Darby бичачі клітини бика MeOH метанол хв хв мілілітри мм мілімоляр MPN Мікотоксична свиняча нефропатія m-rns вісник рибонуклеїнової кислоти m/z маса/заряд n кількість NADH нікотинамід аденин динуклеотид N 2 азот nm наномолярний ng нанограмм nn невизначуваний PBS фосфатно-сольовий сольовий розчин p.o. per os
Сторінка VII ppb частин на мільярд частин на мільйон частин на мільйон RNS рибонуклеїнова кислота r-rns рибосомальна рибонуклеїнова кислота RP Зворотно-фазова RNS рибонуклеїнова кислота s.c. підшкірний аналіз SCE сестринський хроматидний обмінний аналіз TBME третинний бутил-метиловий ефір TLC тонкошарова хроматографія UDS аналіз позаплановий синтез ДНК (синтез репарації ДНК) аналіз V79 клітини фібробласти легенів чоловічих китайських хом'яків ВООЗ Всесвітня організація охорони здоров'я ВОГ мкг мкм мікромоляр
Сторінка 6 літератури Таблиця 2: Рід Aspergillus Penicilium Monascus, що продукує цитринін (Cole and Cox, 1981; Betina, 1989, Roth et al., 1990; Frank, 1992; Blanc et al., 1995b, Wang et al., 2005) Вид A. candidus A. flavipes A. niveus A. terreus P. canescens P. citroviridae P. citrinum P. claviforme P. expansum P. fellutanum P. implicatum P. janthinellum P. jenseni P. lividum P. palitans P. purpurrescens P. . roqueforti P. spinolosum P. velutinum P. verrucosum M. floridanus M. lunisporas M. pallens M. pilosus M. purpureus M. ruber M. sangiuneus
Сторінка 19 літератури 6 Методи виявлення цитриніну Порівняно з іншими мікотоксинами, даних про наявність цитриніну в їжі є небагато. Частково це пов’язано з його аналітичними особливостями, внаслідок чого нестабільність токсину під час підготовки зразка та сильно коливаються швидкості відновлення, спричинені ним (Wilson, 1994), а також виражений хворобливий результат при хроматографічному виявленні можуть виявитися проблематичними (Dick, 1988). На сьогоднішній день виявлення цитриніну в основному проводили за допомогою тонкошарової хроматографії (TLC) (Blanc et al., 1995a, b, Martins et al., 2002, Gimeno, 1984), високоефективної рідинної хроматографії (HPLC) з УФ (Phillips et al., 1980) або флуоресцентної детекції ( Lepom, 1986, Reinhard & Zimmerli, 1999b, Schneweis et al., 2001) та газова хроматографія (GC) (Shu & Lin, 2002). та імуноферментні аналізи (EIA) (Abramson et al., 1996, 1999, Dietrich et al., 1998, 1999, Vrabcheva et al., 2000, Schmid, 2002).
Сторінка 20 Матеріал та методи C Матеріал та методи 1 Матеріал 1.1 Зразок матеріалу У цій роботі досліджували переважно зерно та зернопродукти, а також фруктові та овочеві соки. Крім того, були проаналізовані окремі азіатські продукти харчування. Зразки були отримані у роздрібних торговців продуктами харчування. Зернові культури Всього було проаналізовано 380 зразків на наявність цитриніну. З них 279 - це зерно/зернопродукти та 69 - кукурудза/продукти з кукурудзи. Крім того, було досліджено 19 продуктів з гречки/гречки та 13 зразків рису. Фруктові та овочеві соки З 98 аналізованих соків 34 були яблучним, 27 апельсиновим, 7 виноградним, 8 ананасовим, 4 грушевим, 7 банановим, 3 персиковим, 4 полівітамінними, 3 томатними та 1 мандариновим соками. Азіатська їжа 2 зразки вина саке та 2 соуси хой-сін, а також азіатська пряна паста були досліджені на наявність цитриніну. Для розробки та перевірки методів виявлення використовували мікологічно нешкідливий зразковий матеріал. Штучне забруднення матеріалу зразка відбувалося стандартними розчинами цитриніну.