Поведінкові фармакологічні та молекулярно-біологічні дослідження щодо виведення опіатів у щурів -

Поведінкові фармакологічні та молекулярно-біологічні дослідження щодо виведення опіатів у щурів Дисертація біологічного факультету Мюнхенського університету імені Людвіга Максиміліана Відділення нейробіології Інституту біології. Крістіан Кіршке 31 жовтня 2001 року

щодо

Перший звіт: Другий звіт: Спеціальний звіт: проф. Райнер Ландграф Проф. Пітер Шлегель День усного іспиту Райнера Спанагеля: 17 червня 2002 р

Зміст 1. Загальний вступ 3 2.1. Вступ [S 35] -ГТФγS дослідження авторадиографії 11 2.2. Матеріал та методи дослідження [S 35] -ГТФγS авторадиографія 17 2.2.1. Тварини та тваринництво 17 2.2.2. Процедура випробування та дизайн групи 17 Дослід 1 17 Дослід 2 18 Дослід 3 19 2.2.3. Виділення ділянок мозку 19 2.2.4. [S 35] -ГТФγS авторадиографія 21 2.2.5. [H 3] -ДАМГО-дослідження зв’язування 22 2.2.6. Оцінка та статистика 23 2.3. Результати [S 35] -ГТФγS дослідження авторадиографії 25 Дослід 1 25 Дослід 2 31 Дослід 3 35 2.4. Обговорення [S 35] -ГТФγS дослідження авторадиографії 37 3.1. Вступ до концепції низьких доз налоксону 42 3.2. Матеріал та методи Концепція низьких доз налоксону 46 3.2.1 Тварини та тваринництво 46 3.2.2 Гранули морфіну 46 3.2.3. Експерименти у відкритому грунті 47 Введення низьких доз налоксону гостро 47 Сенсибілізація 48 3.2.4. Експерименти в ящиках Скіннера 49 дискримінація наркотиків 49 Відміна опіатів у ящиках Скіннера 50 3.2.5. Експеримент у спостережних ящиках 51 3.2.6. Оцінка та статистика 52 3.3. Результати концепції низьких доз налоксону 54 Морфінові гранули 54 Експерименти у відкритому грунті 55 Експерименти в ящиках Скіннера 58 Експерименти в ящиках спостереження 61 3.4. Обговорення концепції низьких доз налоксону 63

4.1. Індукція умовного виведення 68 4.2. Матеріал та методи умовного вилучення 74 4.2.1 Тварини та тваринництво 74 4.2.2. Тваринна модель умовного виведення 75 4.2.3. Експеримент у відкритому полі 77 4.2.4. Тест на гіпералгезію (гаряча плита) 77 4.2.5. Вимірювання гормонів стресу 77 4.2.6. Порівняння моделі тварин з парадигмою стресу 78 4.2.7. гібридизація in situ 79 4.2.8. Втручання мемантином 82 4.2.9. Оцінка та статистика 82 4.3. Результати умовної абстиненції 83 Частина 1: Модель на тваринах для вимірювання симптомів умовної абстиненції 83 Частина 2: гібридизація in situ 96 Частина 3: Фармакологічне втручання з використанням мемантину 99 4.4. Обговорення умовної абстиненції 106 Частина 1: Модель тварини для вимірювання симптомів умовної абстиненції 106 Частина 2: Гібридизація in situ 109 Частина 3: Фармакологічне втручання з використанням мемантину 111 5. Висновок 113 6. Бібліографія 116 Подяки 131 Автобіографія 132

Досі немає відомостей про активність зв’язаних з мкг-опіоїдними рецепторами білків G при абстиненції, тому питання про те, наскільки впливають на надмірну активність нейронів при відмові, білки G та їх функціональність не з’ясований. Таким чином, метою цього дослідження є дослідити активність зв’язаних µ-опіоїдних рецепторів G-білків при виведенні з урахуванням різних параметрів. Метод дослідження - метод Сім та співавт. (1995) додатково розробив авторадиографію [S 35] -GTPγS, яка дозволяє проводити вимірювання активності на значною мірою інтактному відділі мозку і одночасно визначати точну анатомічну локалізацію цієї активності. Це також дозволяє проводити подальші методи молекулярно-біологічного дослідження (наприклад, дослідження зв'язування ліганду) на тому самому мозку, щоб виявити будь-які відмінності у взаємодії між зв'язуванням рецепторів та активацією білка G. 16

10 10 +5 +5 0 0 -5 -5 -10 -15 -10 Брегма-15 0 Брегма 0 5 5 5 5 0 Інтерактивне 10 0 Інтерактивне 10 +15 +10 +5 0 -5 +15 +10 +5 0 -5 Nucleus accumbens Interaural 10,60 мм Bregma 1,60 mm 10 10 +5 +5 0 0 -5 -5 -10 -15-10 Bregma-15 0 Bregma 0 5 5 5 5 0 Interaural 10 0 Interaural 10 +15 +10 +5 0-5 +15 +10 +5 0-5 LV Центральне ядро ​​мигдалини II Інтераальне 6.70 мм Брегма -2.30 мм 10 10 +5 +5 0 0-5 -5-10 -15-10 Брегма-15 0 Брегма 0 5 5 5 5 0 Interaural 10 0 Interaural 10 +15 +10 +5 0-5 +15 +10 +5 0-5 Locus coeruleus Nucleus parabrachialis Interaural -0,80 мм Bregma -9,80 мм Рис. 4: Ілюстрація та положення досліджуваних областей мозку. Представлення, модифіковане від Paxinos and Watson (1998) 20

2.2.6. Оцінка та статистика Оцінка авторадиографії та статистики [S 35] -GTPγS: Розроблені фільми були оцифровані за допомогою відеокамери (Sony XC-77) та оцінені за допомогою комп’ютера (Optimas, BioScan). Ступінь почорніння окремих областей мозку реєстрували за допомогою денситометрії, а радіоактивність [S 35] визначали шляхом порівняння застосованого стандарту [C 14] (NEN) та розрахункового коефіцієнта перетворення. Результат виражали в nci/g. Коефіцієнт перерахунку розраховували шляхом відшарування інкубованих зрізів із предметних стекол, визначення ваги та визначення радіоактивності в рідинній сцинтиляторній фотометрії. Коефіцієнт перерахунку розраховували за рівнями сірого та застосованим стандартом [C 14] на основі результатів рідинної сцинтиляторної спектрофотометрії. Отримані дані були виражені як групове середнє ± стандартна помилка (SEM). Статистичні розрахунки проводили за допомогою двофакторного дисперсійного аналізу (ANOVA, фактор A: базальне вимірювання стимуляції проти стимуляції DAMGO, фактор B: групи). Тест Ньюмана-Кельса був використаний як наступний пост-hoc тест. Якщо ймовірність помилки p