РНК вірусного гепатиту С (кількісна) - Синево

Загальна інформація та рекомендації

Вірус гепатиту С (HCV), який є членом сімейства Flaviviridae, передається переважно парентерально, при цьому частота зараження HCV висока у пацієнтів з трансплантацією органів або переливанням крові, у людей, які вживають внутрішньовенно зловживання наркотиками, та хворих на діаліз нирок 1; 2 .

Гострі інфекції, як правило, протікають легко або безсимптомно, але прогресування хронічного гепатиту відбувається в 60-90% випадків.

Характеристика геному ВГС та кодованих ним білків дозволила розробити як серологічні методи визначення специфічних антитіл, так і молекулярні тести для підтвердження діагнозу та моніторингу терапії. Наявність антитіл проти ВГС є лише показником впливу ВГС і не може вважатися маркером поточної інфекції 1 .

Серед біохімічних маркерів пошкодження печінки рівень аланінамінотрансферази (АЛТ) вважався важливим елементом рішення щодо проведення біопсії печінки та/або початку противірусної терапії. Однак ступінь підвищення рівня АЛТ не може бути прямо пов'язана з рівнем ВГС-інфекції, оскільки: у пацієнтів із хронічним гепатитом С рівень АЛТ в сироватці може коливатися спонтанно, при цьому можливі тривалі періоди біохімічної ремісії; На рівень АЛТ можуть впливати інші фактори, такі як вживання алкоголю, пов'язані з ними ліки, наявність інших вірусних інфекцій, неалкогольний стеатоз печінки; існує категорія пацієнтів (за оцінками 20-40% випадків хронічної ВГС-інфекції), які мають постійно нормальний або дискретно підвищений рівень АЛТ, в умовах безперервної реплікації вірусу .

З іншого боку, виявлення шляхом ампліфікації нуклеїнової кислоти за допомогою ланцюгової реакції полімеризації (ПЛР) забезпечує міру реплікації вірусу, корисно як для діагностики активної інфекції, так і для моніторингу лікування. Нові тести, які кількісно визначають вірусне навантаження за допомогою технології "ПЛР у режимі реального часу", мають вищу аналітичну чутливість і набагато ширший (вимірюваний) діапазон лінійності порівняно із звичайною технологією ПЛР 1; 2 .

Щодо діагнозу, за допомогою методу ПЛР можна виявити віремію ВГС до імунологічної сероконверсії 2 .

Визначення віремії також корисно для встановлення прогресування захворювання та оцінки ефективності противірусної терапії як для класичної схеми лікування, що включає комбінацію препарату пегільованого інтерферону (PegINFα) з рибавірином, так і для нових протоколів, що містять препарати з прямою противірусною дією 1 .

Зібраний зразок - венозна кров 2 .

Збиральний контейнер - пилосос, що містить ЕДТА як антикоагулянт 2 .

Кількість зібраного - поки вакуум дозволяє 2 .

Причини відхилення спробувати - використання гепарину як антикоагулянта 2 .

Необхідна обробка після збору врожаю - відокремте плазму максимум за 1 день від збирання шляхом збирання шляхом центрифугування при 800-1600 х г протягом 20 хвилин при кімнатній температурі, а потім перенесіть у поліпропіленову пробірку (хв. 2 мл плазма) 2 .

Стабільність зразка - відокремлену плазму можна зберігати протягом 72 годин при кімнатній температурі, 7 днів при 2-8 ° C або принаймні 6 тижнів заморожувати при -80 ° C. Зразки можна заморожувати/розморожувати до п'яти разів без втрати РНК HCV 2 .

Метод - ПЛР у режимі реального часу (TaqMan): ланцюгова реакція полімеризації з виявленням накопиченого продукту ПЛР у режимі реального часу шляхом вимірювання випромінюваної флуоресценції.

Примітка: обробка зразків здійснюється автоматично 2 .

Довідкові значення - невизначувана HCV-РНК; межа виявлення методу в діапазоні лінійності становить 15 МО/мл, значення, яке збігається з аналітичною чутливістю. "Невизначуваний" результат означає, що це або дуже низька віремія (нижче межі кількісного визначення), або відсутність вірусемії. Результат РНК ВГС 2 .

Інтерпретація результатів

Результати віремії виражаються як чисельно (МО/мл), так і в логарифмічній формі (log МО/мл). Логарифмічна експресія корисна для оцінки реакції на лікування. Зміна віремії на 1 журнал від вихідного рівня свідчить про 10-кратне збільшення або зменшення. Досягнення позитивного результату свідчить про наявність активної інфекції .

Моніторинг віремії за класичним режимом противірусного лікування

PegINFα у комбінації з рибавірином призначається для лікування хронічного гепатиту типу С у дорослих пацієнтів з HCV-позитивною РНК, а також у пацієнтів із компенсованим цирозом печінки після вірусної інфекції C.

Метою противірусного лікування є стійкий вірусологічний відповідь (SVR) визначається як невизначувана HCV-РНК через 6 місяців після закінчення лікування.

На відповідь на противірусне лікування впливають численні фактори, або вірусологічні (генотип HVC, рівень базальної віремії), або пов’язані з господарем (раса, тяжкість захворювання печінки, резистентність до інсуліну). Поряд з цим існують також коригуючі фактори, які з'явилися під час початкової терапії, але які можна втрутитись при другій спробі лікування (зниження високих доз або навіть припинення лікування через гематологічні побічні ефекти або депресію; низька відповідність) 4 .

Залежно від того, коли відбувся вірусний кліренс, вірусологічна реакція може потрапити в одну з наступних категорій:

- швидка вірусологічна реакція ("RVR"): отримання невизначуваної HCV-РНК через 4 тижні після початку терапії; пацієнти вважаються "оперативно реагуючими";

- рання вірусологічна реакція (“Рання вірусологічна реакція”, EVR) завершена: визначається невизначуваною вірусемією через 12 тижнів після початку терапії; пацієнти вважаються "відповідаючими на стандарт";

- повільна вірусологічна реакція ("Повільна вірусологічна реакція") або частково рання вірусологічна реакція: визначається зменшенням віремії на ≥2 log10 від вихідного рівня через 12 тижнів після початку лікування та отримання не виявленої РНК ВГС на 24 тижні; пацієнти вважаються «повільно реагуючими» 3; 4 .

З іншого боку, існують наступні категорії, пов’язані з провалом противірусної терапії:

- невірусологічна реакція (“відсутність відповіді”): визначається зменшенням віремії на 4 .

Тривалість комбінованого лікування залежить від генотипу вірусу. Відповідно до стандартних програм противірусної терапії, пацієнти, інфіковані генотипом 1 або генотипом 4 ВГС, незалежно від вихідної вірусемії, повинні отримувати лікування протягом 48 тижнів. Багатонаціональні клінічні випробування показали, що у пацієнтів, інфікованих генотипами 2 або 3, тривалість комбінованої терапії може бути скорочена до 24 тижнів без шкоди для ефективності (стійкий вірусологічний відповідь становить 84%) 5 .

Дані дослідження INDIV-2 вказують на можливість встановлення індивідуальної терапії, керуючись вірусологічною реакцією, у пацієнтів з генотипом 1/4, наступним чином:

Моніторинг вірусемії для протоколів, які включають противірусні препарати прямої дії (терапія без інтерферону)

Віремія визначатиметься до початку терапії, необов’язково через 2-4 тижні, в кінці лікування (через 8, 12, 16 або 24 тижні, залежно від терапевтичного режиму) та через 12 або 24 тижні після закінчення лікування 7 .

Гепарин інгібує ПЛР, тому його не слід використовувати як антикоагулянт 2 .