Стероїдний екран

Управління: Професор доктор Єжи Адамський
Інститут: Інститут експериментальної генетики, Центр Гельмгольца, Мюнхен
Домашня сторінка: www.helmholtz-muenchen.de/en/ieg/group-molecular-endocrinology/index.html

Стероїди контролюють процеси диференціювання та проліферації клітин і тканин. Недавні результати також свідчать про роль метаболізму стероїдів в апоптозі та нейрорегенерації. Дефекти метаболізму стероїдів сприяють патогенезу багатьох багатофакторних захворювань, таких як рак, синдроми полікістозу яєчників, захворювання кісток і хрящів або неврологічні захворювання. Деякі спадкові захворювання також викликані порушеннями біосинтезу стероїдного попередника холестерину, такими як В. Синдром ДИТИНИ, хондродисплазія точковий та синдром Сміта-Лемлі-Опітца. Крім того, кортикостерон є важливим маркером стресу та метаболічних розладів (діабет).
Основною метою екрану метаболізму стероїдів є виявлення нових моделей тварин для захворювань, що залежать від метаболізму стероїдів. Для розробки нових методів лікування шукають тваринних моделей діабету, ожиріння та депресії.

стероїдний

Мутантні лінії миші з відхиляючимся метаболізмом стероїдів можна знайти на первинному екрані. Дорослих мишей обстежують на предмет різниці концентрацій стероїдів у плазмі крові. Кров забирають ретро-бульбар у мишей, знеболених, а плазму виробляють центрифугуванням. Ключові стероїди кортикостерон, тестостерон та андростендіон витягують із плазми та кількісно визначають за допомогою мас-спектрометричних методів. Миші з низьким зростом, катаракта, дефекти шкіри, вади розвитку кінцівок та порушення репродуктивної біології чи поведінки є найбільш цікавими кандидатами на екран, оскільки відповідні фенотипи спостерігаються також при захворюваннях людини на метаболізм стероїдів.

У нашому аналізі ми кількісно визначаємо кілька стероїдів (тестостерон, кортикостерон, андростендіон) плазми миші одночасно з методом ВЕРХ-МС/МС, який ми перевірили (Haller et al, 2010).

3: Технологія ВЕРХ-МС/МС в GAC

Як вторинний екран ми пропонуємо кількісне визначення до 186 ендогенних метаболітів (амінокислоти, гексози, гліцерофосфоліпіди, сфінгомієліни, ацилкарнітини, біогенні аміни) з 10 мікролітрів мишачої плазми на метаболомічній платформі GAC. Аналіз ELISA для кількісного визначення DHEA у плазмі доступний за запитом.

Приклади опублікованих результатів:
Концентрація тестостерону в сироватці крові самців мишей Srgap3 -/- знижена, але не пов'язана з морфологічними змінами мутанта (Waltereit et al, 2012).

У лінії мутантів мишей NGFN-Ali18, першій неіндукованій моделі миші для псоріатичного артриту, дерматиту та остеопорозу, ми змогли виявити знижену концентрацію тестостерону (Abe et al, 2011).

Результати первинного скринінгу лінії Cox4 - без змін DHEA та тестостерону - були опубліковані в FASEB (Huttemann et al, 2012).

Змінені концентрації кортикостерону, специфічні для генотипу, були виявлені в лініях HMGN1, 3 та 5 на первинному екрані. Результати були опубліковані Nucleic Acids Research (Kugler et al, 2013).

Опубліковані результати первинного скринінгу лінії ADAR2 - відсутність змін у DHEA та тестостероні (Horsch et al, 2011).