Візуалізація ефектів позитивного раннього досвіду, тактильна стимуляція на дендриті

Резюме

У цій роботі описані процедури тактильної стимуляції цуценят та фарбування нейрональної морфології після Гольджі-Кокса. Тактильна стимуляція - це позитивний досвід, який застосовують у перинатальний період, погладжуючи найменших господарською тканиною. Фарбування за Гольджі-Коксом - це надійна процедура, що дозволяє візуалізувати цілі нейрони.

ефектів

Анотація

Вступ

Протокол

Усі експерименти проводились відповідно до Канадської ради з догляду за тваринами та схвалено Університетом Летбриджа, Комітетом з догляду за тваринами.

А. Розведення та тактильна стимуляція

  1. Видаліть дамби з їх кліток і помістіть їх у тимчасову клітку з їжею та водою. Зберігайте дамбу та тимчасову клітку в приміщенні для розведення/розміщення.
  2. Зважте цуценят групою перед ранковим сеансом тактильної стимуляції (09:00). На кожен сеанс щури перевозять цуценят у свої клітини в окрему випробувальну камеру для тактильної стимуляції. Помістіть клітку будинку на грілку, встановлену на 24 ° C.
  3. За допомогою жорсткої дошки розділіть клітку будинку на дві половини. Помістіть цуценят у половину групи стимуляції, а в другу половину контролюйте цуценят, встановіть таймер на 15 хв.
  4. За допомогою м’якого порошку чистіть малечу всіх груп тактильної стимуляції одночасно 15 хвилин поспіль. Молоді єноти (

2. Жертвоприношення та фарбування Гольджі-Кокса

  1. Приблизно при P100 вводять передозування пентобарбіталу натрію шляхом ін’єкції ІР щурам та вливають внутрішньосерцево приблизно 100 мл 0,9% сольового розчину.
  2. Витягніть мозок, коли інфузія закінчиться. Видалити мозок з черепа, розрізати зоровий нерв під напругою, щоб зберегти мозочок цілим; дослідники можуть вибрати, чи зберегти або видалити запашні цибулини. Помістіть витягнуті мізки в непрозору пляшку Нальгена з 20 мл розчину Гольджі-Кокса 14.
  3. Тримайте мозок у розчині Гольджі-Кокса протягом 14 днів. Через 14 днів замініть розчин Гольджі-Яловичини на 30% розчином сахарози. Перед різанням тримайте мозок у розчині сахарози протягом 2-5 днів.

Примітка: Якщо мозок не може бути розділений протягом 14 днів після перенесення розчину сахарози, дослідник повинен замінити сахарозу новим запасом 30% сахарози. Дослідник може замінювати сахарозу кожні два тижні протягом 4 місяців без негативного впливу на забарвлення.

* Ксилол можна використовувати як заміну HemoDe. Для забезпечення рівномірної якості фарбування слід використовувати нові рішення для кожної обробленої розсувної сітки.

  1. Після останнього 15-хвилинного виходу в HemoDe закрийте слайди Permount.
  2. Дайте предметним стеклам висохнути на повітрі, перш ніж досліджувати їх під мікроскопом.

Репрезентативні результати

Коли ця процедура фарбування дотримана належним чином, утворюється однорідне і рівномірне фарбування дендритів і шипів. Подивитися Фігура 1 для зображення нейронального фарбування Гольджі-Кокса. Ця процедура утворює фарбування, яке можна порівняти з візуалізацією дендритних полів, які не захаращені, і можуть дозволити включення новоствореної тканини за методами in vitro. Встановлено, що методика фарбування на основі вібратома Гольджі-Кокса дає більш широко розповсюджене фарбування кінцевих гілок та пірамідальних нейронів, фарбування з допомогою колодованої інкорпорованої тканини та тканини криостатичного зрізу, 15. Крім того, оскільки цей метод фарбування пронизує весь мозок, усі ділянки можуть бути проаналізовані відразу або в майбутньому. Оскільки локалізація морфологічних змін не завжди очевидна при формуванні вихідної гіпотези, цей процес дозволяє дослідити додаткові ділянки мозку і запобігає видаленню тканин, які можуть бути корисними в майбутньому.

Цей метод фарбування можна використовувати для надійного фарбування будь-якого віку мозку щурів (P0-вік). Однак при фарбуванні молодих мізків (

Обговорення

Через очевидну пластичність мозку, що розвивається, важливо ретельно продумати експериментальні процедури, що включають ранні експерименти, і зробити спроби контролювати всі змінні, що беруть участь. З цієї причини під час процедури тактильної стимуляції використовується дизайн хрестоподібного посліду, щоб забезпечити щенятам подібний досвід у всіх інших сферах розвитку. Крім того, також важливо, щоб для аналізу було відібрано декількох цуценят з декількох послідів, щоб уникнути можливості наслідків поляризації в одному дитинчаті або посліді.

Розкриття інформації

Автори заявляють, що у нас немає конкуруючих фінансових інтересів.