Clostridium difficile-токсин AB - Синево

Загальна інформація та рекомендації

Clostridium difficile - спороносна анаеробна грампозитивна паличка - відповідає за псевдомембранозний коліт та індуковану антибіотиками діарею.

Хоча токсини C. difficile вже давно висвітлювались дослідниками, лише в 1970 р. Була підтверджена їхня роль у розвитку псевдомембранозного коліту. .

C. difficile виробляє щонайменше 2 токсини, звані А і В. Токсин А, ентеротоксин, збільшує секрецію рідини та запалення в слизовій оболонці кишечника. Токсин В, який має in vitro цитотоксичну дію, приблизно в 1000 разів сильніший за токсин А, діє з ним синергетично. Хоча токсин А продукують майже всі штами C. difficile, які беруть участь у появі хвороби, нещодавно було показано, що деякі штами виділяють лише токсин B 4. .

Коліт, індукований C.difficile, є наслідком дисбалансу бактеріальної флори товстої кишки, колонізації C.difficile та продукування токсинів. Лікування антибіотиками відповідає за зміну флори, а основною мішенню інфекції є госпіталізовані люди. Колонізація відбувається фекально-оральним шляхом. C. difficile також утворює термостійкі спори, які можуть зберігатися в навколишньому середовищі від декількох місяців до декількох років. Коли забруднення поширене, епідемії діареї можуть виникати в лікарнях та інших відділеннях допомоги. Нормальна кишкова флора протистоїть колонізації, але лікування антибіотиками, пригнічуючи флору, сприяє розмноженню C.difficile 1 .

Спочатку хвороба була описана у пацієнтів, які отримували лікування кліндаміцином, але в даний час вважається, що будь-який антибіотик може викликати псевдомембранозний коліт. У дослідженнях, в яких брали участь велика кількість пацієнтів, понад 70% випадків були пов'язані з прийомом цефалоспоринів (особливо другого та третього покоління) 3. Ампіцилін та амоксицилін слідують у порядку частоти. Менш задіяні макроліди та інші пеніциліни. Аміноглікозиди, флорохінолони, триметоприм-котрімоксазол, іміпенем та меропенем можуть іноді спричиняти захворювання. Навіть короткий прийом антибіотика може викликати коліт. Ризик вищий у разі тривалого лікування та комбінації антибіотиків 1 .

У людей похилого віку та пацієнтів з ослабленим імунітетом найбільш схильні до розвитку коліту, спричиненого C. difficile. Незважаючи на те, що маленькі діти часто є носіями штамів Clostridium difficile, які виділяють токсини, клінічно проявлена інфекція у цій віковій групі є незвичною.

Колонізація C. difficile генерує широкий спектр клінічних станів, від безсимптомного статусу носія, легкої самообмежуючої діареї до псевдомембранозного коліту та фульмінантного коліту. Найсерйозніші ускладнення - токсичний мегаколон, перфорація товстої кишки та перитоніт. У більшості пацієнтів діарея розвивається під час або відразу після початку лікування антибіотиками. Однак 25-40% пацієнтів не набувають симптомів раніше 10 тижнів після закінчення антибіотикотерапії. Деякі випадки спонтанного захворювання також були описані у пацієнтів, які не мали в анамнезі лікування антибіотиками; 1; 3; 4 .

Найчастіше клінічна картина включає:

-легка або середня діарея, рідко кривава;

-коліки болі в животі;

Діагноз коліту, спричиненого C. difficile, слід підозрювати у будь-якого пацієнта з діареєю, який отримував лікування антибіотиками протягом останніх 2 місяців та/або діарея почалася через 72 години (або більше) після госпіталізації.

Виявлення токсинів C. difficile важливо для встановлення відповідної терапії. Якщо клінічні прояви не припиняються після припинення інкримінованого лікування антибіотиками, рекомендується пероральне введення ванкоміцину, метронідазолу або бацитрацину.

Звичайний посів бактерії не рекомендується через часте виділення нетоксинсекретуючих штамів 3 .

Тест, проведений у нашій лабораторії, виявляє токсин А та/або В у калі за допомогою імунохроматографічної методики 2 .

Зібраний зразок - свіжовиділені фекалії; рекомендована кількість - 1-2 г сформованого калу або 1-2 мл рідкого калу; зразки, зібрані на ректальному мазку 3, не приймаються .

Збиральний контейнер - одноразова ємність для калу; додавання консервантів заборонено 2 .

Необхідна обробка після збору врожаю - аналіз проводиться на свіжовиділених фекаліях максимум за 3 години після збору врожаю (бажано). Якщо це неможливо, зразок зберігають при температурі 2-8 ° C не більше 3 днів. Для обробки певну кількість гомогенізованого зразка обробляють спеціальним розчинником для солюбілізації токсинів і центрифугують для відділення надосадової рідини 2. .

Перевірка стійкості - після збору зразка потрібно якомога швидше транспортувати до лабораторії; зразок стабільний протягом 3 днів при 2-8 ° 2 .

Метод - імунохроматографічні. Кількість розведеного зразка змішується з розчином кон'югату 1 (містить специфічні моноклональні антитіла до токсину Clostridium difficile A та токсину B, кон'югованого з кольоровими мікрочастинками), та з розчином кон'югату 2 (містить біотинільовані антитоксин A та антитоксин B специфічні антитіла ). Певний об’єм цієї суміші переноситься у спеціальне вікно тестової коробки; коробка містить стрептавідин, іммобілізований у досліджуваній смужці, та антитіла козячих антиімуноглобулінів у контрольній смузі. Специфічні антитіла зв'язуються з антигеном у зразку і утворюють комплекс "антиген-сендвіч". Комплекси мігрують через капіляри, досягають ділянки, що містить тест-смужку, зв’язуються зі стрептавідином, який присутній у твердій фазі, і їх можна розглядати як чорну кольорову смужку будь-якої інтенсивності у вікні результатів. За відсутності токсину А та/або В у зразку візуалізація стрічки не проводиться. Тест перевіряється лише у тому випадку, якщо у вікні управління 2 отримана чорна смуга будь-якої інтенсивності .

Довідкові значення

Токсин Clostridium difficile A/B - негативний.

Результати виражаються якісно: позитивні/негативні 2 .

Межі та перешкоди

Негативний результат не виключає наявності стану, асоційованого з C. difficile. Помилково негативний результат може мати такі причини:

-неналежний збір, транспортування або зберігання зразка;

-низький рівень A/B токсинів, нижчий за межу виявлення методу;

1. Крейг А Грончевський, доктор медицини, Джонатан П. Кац, доктор медичних наук. Clostridium Складний коліт. eMedicine Gastroenterology (оновлення, серпень 2006 р.). Тип посилання: Інтернет-спілкування.

2. Синевська лабораторія. Конкретні посилання на використовувану технологію роботи 2010. Тип посилання: Каталог.