Ідентифікація дерматофітів - мас-спектрометрія (система MALDI-TOF) Біоклініка

Огляд

Дерматофіти або дерматофітні гриби - це ниткоподібні кератофільні мікроміцети, класифіковані таксономічно за порядком Onygenales, сімейство Arthrodermataceae і є потенційними збудниками людей і тварин. З морфологічної точки зору характерна наявність двох типів конідій: мікроконідій (з однією клітиною) та макроконідій (з кількома клітинами, які також називають ложами).

Їх недосконалі (безстатеві) стадії, які також називаються анаморфними формами, згруповані в три роди - Epidermophyton, Microsporum і Trichophyton, тоді як досконалі (статеві) стадії, відомі як телеоморфні форми, входять до роду Arthroderma.

Екологія

У природних умовах дерматофіти мають здатність розщеплювати кератин. Ця метаболічна здатність дозволяє їм виживати в навколишньому середовищі, а іноді і виробляти поверхневі захворювання шкіри, волосся або нігтів - у людей і тварин.

Залежно від типу кератину, який використовується переважно, види дерматофітів діляться на три категорії:

Геофіли використовують девіталізований кератин з лускоподібних клітин, волосків та інших фрагментів вінірів, що знаходяться в навколишньому середовищі, особливо в грунті. У людей і тварин рідко можуть виникати хвороби; передача між особинами майже нульова.
Зоофіли мають тропізм щодо кератину в шкірі та волосяному покриві тварин. В основному це вражає тварин, хоча деякі з них надзвичайно легко передаються людям. Міжособистісна передача, хоча і можлива, надзвичайно низька.
Антропофіли, в основному паразитують на кератині людини. Вони виробляють хвороби у людей, які іноді характеризуються високим ступенем зараження.

Геофільні види Зоофільні види Антропофільні види

М. cookei	M. canis	E. флокозум
M. gypseum	M. gallinae	M. audouinii
M. praecox	M. nanum	M. ferrugineum
Т. ажеллой	M. persicolor	Т. концентрикум
T. terrestre	T. erinacei	T. menthagrophytes var. міжпальцевий
Т. ванбрусегемія	T. menthagrophytes var. менатгрофіти	Т. rubrum
Т. simii	Т. schoenleinii
Т. tonsurans
Т. violaceum
T. soudanense

Епідеміологічні особливості

Джерела забруднення та спосіб передачі є особливо важливими епідеміологічними ознаками в процесі ідентифікації задіяних видів; наприклад, контакт з дрібними дикими ссавцями або домашніми тваринами може бути причиною скорочення дерматофітів, продукованих зоофільними видами-носіями. З іншого боку, міжособистісний контакт або виконання певних видів спортивної діяльності можуть схилити до появи інфекцій з переважно антропофільними видами дерматофітів.

Поширеність дерматофітної інфекції серед загальної популяції становить 10-20%.

Вказівка клініцистом у посиланнях на лабораторного лікаря деяких анамнетичних даних з епідеміологічним характером є не тільки рекомендованою, але й обов’язковою, вона забезпечує високий ступінь точності ідентифікації відповідних видів дерматофітів.

Клінічні аспекти

Дерматофіти легко атакують епідерміс і вініри - ороговілі анатомічні структури
Місцева запальна реакція має різну ступінь інтенсивності, залежно від залученого дерматофіта та імунного статусу зараженого господаря.
У виняткових випадках пошкодження тканин можуть прогресувати до більш глибоких структур; це випадок дерматофітичної хвороби (хвороби Хадіди-Шусбоє) та міцетоми, спричиненої деякими дерматофітами.

Класифікація клінічних аспектів - поверхневі дерматофіти

Епідермофіція

Обрізана епідермофітія (цицинатний «герпес»), найпоширеніша форма tinea corporis
Паховий інтертріго (tinea cruris)
Intertrigo interdigito-plantar (найпоширеніший прояв tinea pedis)
Поразки підошовного гіперкератозу ("вигляд мокасину")
фолікуліт
Токелау (вкладений лишай)
Інші епідемофіти (комбінації еритема-міхур-ерозія-кора)

Піломікоз

Tinea capitis (мікроспорові та трихофітні ножиці, керіон, фавус)
Лихоманка на обличчі (сикоз)

Оніхомікоз (tinea unguium)

Дистальний піднігтьовий оніхомікоз
Проксимальний піднігтьовий оніхомікоз
Поверхневий лейкоз
Тотальна оніходістрофія

Міцеланея

Дерматофітна хвороба

Дерматофітна міцетома

урожай

лікар-лаборант повинен бути проінформований про ряд важливих аспектів, особливо корисних для діагностики: тип ураження, професія пацієнта (якщо підозрюється якийсь зв’язок із захворюванням), будь-які домашні тварини, з якими він контактував, поїздки пацієнта за кордон, в’їзд контактувати з людьми з ендемічних районів для деяких дерматофітів, відвідувати басейни, спортзали, фітнес-клуби або салони краси в період, що передував появі уражень.
бажано відбирати зразки перед введенням протигрибкових засобів (для місцевих препаратів рекомендується інтервал не менше 5-7 днів від останнього прийому)
попереднє знезараження ділянки збирання не рекомендується, оскільки це може вплинути на життєздатність грибних елементів та отримання негативних культур.

волоски збирають за допомогою пінцета, бажано під ультрафіолетовим світлом, у темній кімнаті. Його відправляють в лабораторію в стерильному контейнері. Максимальний час очікування: 72 години при кімнатній температурі.
уламки нігтів збирають із місця з’єднання здорової тканини із ураженою, зішкрібкою стерильною кюреткою або обрізанням ножицями. Його відправляють в лабораторію в стерильному контейнері. Максимальний час очікування: 72 години при кімнатній температурі.
шкірні лусочки збирають зіскрібком активної зони ураження (зазвичай периферичної) стерильною кюреткою або натисканням та багаторазовим протиранням стерильним тампоном, попередньо змоченим стерильним сольовим розчином. У разі обрізаних дерматофітних уражень рекомендується брати пробу з мазка і передбачає негайне висівання зразка на ізолюючі середовища.
вологі ураження беруть стерильними тампонами, які відправляють у лабораторію в транспортному середовищі.

ОБЕРЕЖНО! Дерматофіти руйнуються, якщо зберігати їх при 4-6 ° C.

Пряме мікроскопічне дослідження

Це обов’язково, воно дозволяє швидко підтвердити підозру на дерматофітну інфекцію та інформацію клініциста задовго до позитивного результату культури.

Культура

Виділенню патогенних грибів сприяє висівання зразків на тверді середовища, що містять циклогексимід, речовину, здатну частково або повністю інгібувати розвиток забруднюючих грибів. Виділення в лабораторних умовах грибів із патологічних зразків, незалежно від їх природи, є безперечною необхідністю для розуміння інфекційного процесу та для початку протигрибкової терапії.

Ідентифікація дерматофітних грибів методом мас-спектрометрії

Класичні методи ідентифікації дерматофітних грибів засновані на спостереженні за макроскопічними ознаками (пігментація, режим росту, текстура колоній), на використанні селективних поживних середовищ та мікроскопічному дослідженні макро/мікроконідій. Ці методи надзвичайно копіткі.

Система MALDI-TOF, що використовує мас-спектрометрію, на сьогодні є чудовою альтернативою звичайним методам ідентифікації.

Інтерпретація результатів

Позитивний результат при нативному мікроскопічному дослідженні

Наявність елементів, що свідчать про грибкову інфекцію, є достатнім для початку лікування, але не гарантує отримання позитивних культур.

Негативний результат при мікроскопії, позитивний у культурі

Вказує на низьку кількість дерматофітних грибів у зразку, зібраному поблизу ураженої ділянки. Показано протигрибкове лікування.

Негативна культура, позитивний результат при прямій мікроскопії

Це може бути пов’язано з урожаєм у центрі ураження, де дерматофіти вже нежиттєздатні, і може бути наслідком попереднього протигрибкового лікування. 33% зразків нігтів дають помилково негативні культури.

Значення виділення грибів із зразків

У більшості випадків виділення дерматофітних грибів має клінічні наслідки. Сапрофітні гриби (Scopulariopsis brevicaulis, Fusarium sp.) Виникають вторинно внаслідок дерматофітної інфекції або травми.

Для фрагментів нігтів ми рекомендуємо проводити повторний збір, якщо вони ізольовані в культурі Fusarium sp., Aspergillus або Acremonium sp.