PDF QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA Тільки для діагностики in vitro Складність CLIA Висока - Безкоштовно

Короткий опис

Завантажити QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA для діагностики in vitro Складність CLIA: Висока.

lite

Опис

QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA

Тільки для “діагностики in vitro” Складність CLIA: висока

Застосування за призначенням QUANTA LiteTM F-Actin IgA - це імуноферментний аналіз (ІФА) для напівкількісного виявлення антитіл IgA проти F-актину гладкої мускулатури в сироватці крові людини. У пацієнтів з клінічними даними, що свідчать про целіакію, наявність антитіл до F-актину класу IgA використовується для оцінки ймовірності значної атрофії ворсинок.

Принцип випробування F-актиновий антиген, очищений афінною хроматографією, був приєднаний до лунок полістирольної мікротитраційної пластини при збереженні вихідної конфігурації. Попередньо розведені контролі та розведені сироватки пацієнта піпетують у різні лунки. Існуючі F-актинові антитіла зв'язуються з антигеном. Залишок зразка/контролю видаляється промиванням. Мічений ферментами анти-людський IgA вводиться піпеткою в лунки і зв'язується з антитілом пацієнта під час другої інкубації. Після видалення залишку кон'югату на наступній стадії промивання додають хромогенний субстрат. Інтенсивність результуючої кольорової реакції вимірюють після зупинки фотометром на мікропланшетному планшеті. Кількісна оцінка проводиться шляхом порівняння значень вимирання пацієнтів зі значенням калібратора.

Зміст набору тестів 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Мікротитраційна ІФА-пластина, покрита високоочищеним F-актиновим антигеном (12-1 х 8 лунок), з тримачем для смужок у фольговій упаковці та негативним контролем ІСА, 1 пляшка буфера зі стабілізатором та сироваткою людини без людських антитіл проти F-актину, попередньо розведений готовий до використання, 1, 2 мл F-Actin IgA ELISA низький позитивний (калібратор), 1 пляшка буфера зі стабілізатором і сироватка людини з антитілами проти F-Actin, попередньо розведений для використання, 1,2 мл F-Actin IgA ELISA High Positive (позитивний контроль), 1 пляшка буфера зі стабілізатором та сироваткою людини з антитілами проти F-актину, попередньо розведений готовий до використання, розчинник зразка HRP 1,2 мл, 1 флакон - кольоровий рожевий із забуференним трис-сольовим розчином, Tween 20, білкові стабілізатори та консерванти, 50 мл HRP промивний концентрат, 1 пляшка з концентратом 40x - Забарвлення червоного кольору буферним сольовим розчином і Твін 20, 25 мл. Для розведення, будь ласка, зверніться до відповідної глави в інструкції. 1

HRP IgA-кон'югат, (козячий), IgA проти людини, 1 флакон - кольорово-жовтий з буфером, білкові стабілізатори та консерванти, 10 мл TMB Chromogen, 1 флакон зі стабілізаторами, 10 мл HRP-стоп-розчину, 0,344 М сірчаної кислоти, 1 флакон - безбарвний, 10 мл

Заходи безпеки 1. 2. 3. 4.

Зберігайте всі реактиви набору при температурі 2-8 ° C. Не заморожуйте. Реагенти стабільні до кінця терміну їх використання при зберіганні та обробці відповідно до вказівок. Поверніть невикористані смужки мікрокринок на оригінальну упаковку, герметично закрийте їх і поверніть у холодильник. Розведений промивний буфер стабільний протягом тижня при температурі 2-8 ° C.

Зразки Тест слід проводити із зразками сироватки. Додавання азидів або інших стабілізаторів до зразків сироватки може негативно вплинути на результати. Не слід використовувати зразки, які забруднені мікробактеріями, гемолітичні, ліпемічні або інактивовані теплом. Після взяття крові сироватку необхідно відокремити від крові. У документі H18-A3 NCCLS рекомендуються такі умови зберігання зразків пацієнтів: 1) Не зберігайте зразки при кімнатній температурі більше 8 годин. 2) Якщо тест неможливо провести протягом 8 годин, зберігайте зразки в прохолодному місці при температурі 2-8 ° C. 3) Якщо тест неможливо провести протягом 48 годин, зразок необхідно заморозити при -20 ° C або нижче. Заморожені зразки необхідно добре струсити після розморожування та перед випробуванням.2.2

Процедура випробування Матеріал, присутній у наборі для тестування 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

F-Actin ELISA мікропланшет (12-1 х 8 лунок), з тримачем для смужок 1,2 мл попередньо розведеного ELISA негативного контролю 1,2 ml попередньо розведеного F-Actin IgA ELISA низький позитивний контроль 1,2 мл попередньо розведеного F-актину IgA ELISA високий позитивний контроль 50 мл розріджувача зразка HRP 25 мл концентрату для промивання HRP, 40-кратний концентрат 10 мл кон’югату IgA HRP (від кози), IgA проти людини 10 мл TMB Хромоген 10 мл зупинного розчину HRP, 0,344 М сірчаної кислоти

Необхідний додатковий матеріал Піпетки для одноразових наконечників піпеток 5, 100, 200-300 та 500 мкл Реакційні флакони Еппендорфа для розведення сироватки, 4 мл обсягу дистильованої або деіонізованої води 1 флакон для розведеного концентрату для промивання HRP Зчитувач для мікротитрувальних пластин з фільтром 450 нм (і 620 нм) для біхроматичного вимірювання)

Метод підготовки до тесту 1. 2.

Доведіть всі реагенти та зразки до кімнатної температури (20-26oC) і ретельно перемішайте. Замініть весь вміст (25 мл) промивного концентрату 975 мл дистильованої води. суміші (розведення 1:40). Розведений буферний розчин стабільний протягом тижня при температурі 2-8 ° C. Якщо відразу не слід використовувати всю мікропланшетну платівку, для приготування 16 лунок можна додати 2 мл концентрату з 78 мл дистильованої води. бути змішаним. Розведіть зразки сироватки 1: 101, змішавши 5 мкл сироватки з 500 мкл розчинника готового для використання зразка. Розведені зразки слід перевірити протягом 8 годин. Не розбавляйте F-Actin IgA ELISA з низьким позитивним контролем, F-Actin IgA ELISA з високим позитивним контролем та ELISA негативним контролем. Для кожного тесту потрібні дві лунки для кожного з трьох контролів та одна або дві лунки для зразка пацієнта (рекомендується, щоб всі зразки готувались у двох примірниках до досягнення необхідної точності та відтворюваності).

Низькопозитивний контроль ІФА F-актину IgA, високий позитивний контроль ІФА Ф-актину ІГА та негативний контроль ІФА слід проводити разом із кожним тестовим запуском, щоб забезпечити належну роботу всіх реагентів та тестового циклу. Оскільки F-Actin IgA ELISA низький позитивний контроль, F-Actin IgA ELISA високий позитивний контроль і ELISA негативний контроль попередньо розведені, етап контролю розведення зразка пацієнта не потрібен. Додатковий контроль для забезпечення якості може бути здійснений відповідно до вказівок національної або третьої

міжнародні органи регулювання чи акредитації. Відповідні засоби контролю можна отримати із сироватки людини та протестувати на 25

Негативний Сумнівний Позитив 1. 2. 3.

Позитивний результат анти-F-актину IgA у пацієнтів з целіакією свідчить про підвищену ймовірність важкої атрофії ворсинок. Негативний результат вказує на відсутність антитіл до F-актину IgA або концентрації нижче межі виявлення тест-системи. Ми пропонуємо додати наступну примітку до лабораторних результатів: “Наступні результати були отримані за допомогою ІФА INOVA QUANTA LiteTM F-Actin IgA. Значення F-актину IgA, які були визначені за допомогою тест-систем інших виробників, не можуть бути змінені. Рівень знайденого титру IgA не можна співвідносити з титром кінцевої точки. "

Обмеження процедури 1. 2. 3. 4.

Імунні комплекси або інші агрегати імуноглобуліну в сироватці крові пацієнта можуть спричинити неспецифічне зв’язування та хибнопозитивні результати. Не всі хворі на целіакію позитивно ставляться до антитіл IgA до F-актину. Не всі позитивні зразки SMA мають антитіла до F-актину IgA. Виявлення антитіл до F-актину-IgA у пацієнтів із захворюваннями печінки слід інтерпретувати з обережністю, оскільки наявність антитіл до F-актину-IgG у цій групі захворювань часто асоціюється з антитілами до F-актину-IgA, які можуть не мати відношення з кишковою патологією. Антитіла до F-актину IgA слід вимірювати лише у пацієнтів з целіакією як допоміжний засіб для оцінки пошкодження кишечника. Результати цього тесту слід використовувати разом із клінічними результатами та іншими серологічними тестами. Ефективні характеристики зразків, крім сироватки, не визначені. 4-й

Дані про ефективність Очікувані значення Нормальний діапазон Панель із 500 зразків, здавалося б, здорових людей (250 чоловіків та 250 жінок) була протестована за допомогою набору QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA. Вік становив від 18 до 80 років (медіана = 41). Специфічність аналізу становила 92,2% (461/500). 3 з 39 зразків виявили позитивні на антитіла до tTG-IgA, тому це можуть бути недіагностовані пацієнти з целіакією. Один із цих трьох зразків також був позитивним до ендомізію і практично є певним випадком целіакії. Поширеність целіакії серед нормального населення США, за оцінками, становить 1 із 133; тому дані про недіагностовані хворі на целіакію в нормальній когорті не є несподіваними

Клінічна чутливість та специфічність Оскільки аналіз IgA на F-актин QUANTA LiteTM призначений для оцінки ймовірності пошкодження кишечника у пацієнтів з целіакією, чутливість та специфічність визначали на основі 445 зразків з результатами біопсії. З 445 зразків 157 мали патологію типу 3 та 288 типу 0, 1 або 2 за Маршем.27 N = 445 Болотна виїмка F-актину IgA одиниці M3a/b/c M0, M1, M2 загальна кількість Pos (> 24, 9 одиниць) 76 14 90 Нег (24,9 одиниць) 60 30 90 Нег (