Дитяча лабораторна діагностика
1 Дитяча лабораторна діагностика Т. Тулассай
2 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в період постнатальної адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
3 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в постнатальному періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
4 сироватка крові, речовини плазматичних клітин крові для лабораторної діагностики еритроцити, (Hb) лейкоцити та інші ядерні клітини (мембранні маркери, ДНК) ретикулоцити кістковий мозок сеча стілець СМЖ тканини навколоплідних вод (за допомогою біопсії та ін. (Забір ворсин хоріона)
5 Клініко-хімічний аналіз з використанням різних методів (фотометрія, ферментативне визначення, хроматографія, мас-спектрометрія та ін.) Мікробіологічні дослідження, класичний метод, мас-спектрометрія, молекулярно-біологічні методи
6 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в постнатальному періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
7 Пренатальна діагностика та профілактика Загальні умови, коли необхідний скринінг Генетичні захворювання, набуті ферментопатії Метаболічні захворювання Хромосомні аномалії Хвороби матері, які вражають плід (діабет, гіпертонія тощо)
8 Пренатальна діагностика та профілактика Медичні засоби Ультрасонографія (анатомічні аномалії) Інвазивні дослідження пренатальної діагностики включають: амніоцентез, відбір проб ворсинок хоріона та хордоцентез (пункція пуповини), аномалії хромосом, біохімічні захворювання, ДНК, материнська кров альфа з клітин пуповинних клітин білка виділяють з пуповинного білка. материнська кров (вільна ДНК плода). У матері можуть бути чужорідні клітини попередньої вагітності)
10 Нормальна картина хромосом
13 α-фетопротеїн, некон'югований естріол, загальний хоріонічний гонадотропін людини (HCG), вільна β-субодиниця HCG, інгібін A та пов’язаний з вагітністю білок плазми A. AFP, некон’югований Estriol, HCG, вільна β-субодиниця HCG, PAPP-A, HCG, вимірювання щільності шиї Tr. + AFP інгібіну A, некон'югований естріол, HCG
14 Практична інформація Перший триместр обстеження проводиться в кінці першого третього (першого триместру) вагітності в період від 11 тижнів +0 днів до 13 тижнів +6 днів включно. PAPP-A є значно більш значимим через 10 тижнів і раніше (8-9 тижнів), ніж у 13 тижнів. І навпаки, вільний β-hcg на 11 тижні менш значущий, який збільшується лише в наступні тижні вагітності, з оптимумом у 2 триместрі (з 14 тижнів).
15 причин використання інвазивних методів пренатальної діагностики: аномальні результати вимірювання щільності шиї та/або комбіновані тести; аномальні результати при порушеннях росту ультразвуку (особливо у другому триместрі вагітності), зміни хромосом у сім'ї або, при попередній вагітності, генетичні захворювання або схильність у родичів Сімейний високий рівень антитіл у крові у резус-негативної вагітної жінки
16 Важливим білком - AFP Alpha-1-Fetoprotein (AFP), також Alphafoetoprotein або α 1 - Fetoprotein, є глікопротеїн у ссавців, який під час ембріонального розвитку людини під час вагітності з ендодермальної тканини та печінки плода, або зокрема у дорослих утворюється в пухлинних клітинах печінки. Фізіологічно фетопротеїн альфа-1 виконує функцію транспортного білка плода, який, зокрема, транспортує мідь, нікель, жирні кислоти та білірубін у плазмі крові плода.
17 Дуже високі концентрації АФП у материнській крові або в навколоплідних водах є ознакою оклюзійних дефектів у майбутньої дитини. Сюди входять дефекти черевної стінки, такі як омфалоцеле та гастрошизис, та дефекти нервової трубки, такі як роздвоєння хребта та аненцефалія. У чоловіків та невагітних жінок високі концентрації AFP можуть свідчити про активний гепатит, цироз печінки та карциному печінки. Низькі значення AFP у період з 14 по 20 тиждень вагітності є ознакою синдрому Дауна (трисомія-21) у майбутньої дитини.
18 Трисомія 18, синдром Едвардса Превалензенце: 1/6000 Низька вага при народженні Закритий кулак Мале стегно, з обмеженим животом Коротка грудина Мікроцефалія Виражена потилиця Мікрогнатія Серце, вади розвитку нирок Розумова відсталість Підошва стопи на гойдалці 95% вмирає 19
20 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в постнатальному періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
21 Оцінка серцево-легеневої адаптації тиску кисню (po 2) щодо насичення киснем кислотно-лужного балансу Ht
22 Циркуляція плода та новонароджених
23 Фізіологічна регуляція пам’яті гіпоксії, ET, LT, NO, PGI 2, Легеневий кровообіг у плода низький, поступове збільшення до 25% серцевого викиду (CO) відбувається приблизно на 40-му тижні вагітності. На легеневий опір впливає співпраця гладких м’язів ендотелію (аутокринно-паракринна регуляція).
25 Альвеолярна гіпоксія та легенева циркуляція: альвеолярне по 2 скорочення малих артеріол. Обструкція дихальних шляхів. Шунтування. Якщо> 20%, легенева гіпертензія. Circulus vitiosus. Паулев-Зубета: Нова фізіологія людини
26 Співвідношення альвеолярної вентиляції (V A) та перфузії (Q) Фізіологічне = 1,0 Паулев-Зубієта: Нова фізіологія людини
27 Кислотно-лужний баланс (SBH) ph: 7,35-7,40 При рН = 7,40 H + концентрація, 40 нмоль/л Na + = 140 ммоль/л (1,0 млн. Х вища концентрація) ph = 6, 1 + журнал HCO 3/CO 2 Хендерсон-Хассельбальх
30 Баланс через три захисні механізми Перша лінія: Буферні системи з хімічними речовинами Друга лінія: Дихальний механізм (зміни в статті CO 2) Третя лінія: Ниркова компенсація (зміни HCO 3 - виведення)
31 Розподіл загальної буферної системи Небікарбонатна буферна система 47% Бікарбонатний буфер 53% Hb та OxyHb 35% Бікарбонат плазми 35% Органічні фосфати 3% Бікарбонат еритроцитів 18% Неорганічні фосфати 2% Білки плазми 7%
33 катіони Аніони Натрій Калій Кальцій Магній Хлорид Бікарбонат Фосфат Сульфат Плазма Інтерстиціальна рідина Внутрішньоклітинна рідина Плазма Інтерстиціальна рідина Внутрішньоклітинна рідина Органічні кислоти Білок 100% 80% 60% 40% 20% 0% Катіонні аніони
34 Регулювання простору рідини ICV ECV PV ISV обсяг
35 Регулювання об'єму клітини за допомогою транспорту іонів ECF osm H 2 O Na K H 2 O ECF osm NaCl H 2 O KCl H 2 O
36 Обробка ниркового бікарбонату
38 Варіанти компенсації при різних кислотно-основних змінах Зміна Очікувана компенсація Метаболічний ацидоз Pco 2 = 1,5 [HCO 3] + 8 ± 2 Метаболічний алкалоз Респіраторний ацидоз Гострий хронічний респіраторний алкалоз Гострий хронічний Pco 2 збільшується на 7 мм рт. Ст. На кожні 10 мекв/l збільшення сироватки [HCO 3] [HCO 3] збільшується на 1 на кожні 10 мм рт. ст. збільшення Pco 2 [HCO 3] збільшується на 3,5 на кожні 10 мм рт. ст. збільшення Pco 2 [HCO 3] зменшується на 2 me/l на кожні 10 mmHg зменшення Pco 2 [HCO 3] зменшується на 4 на кожні 10 mmHg зменшення Pco 2
39 Подальші лабораторні параметри в постнатальному періоді адаптації Ht: 0,60-0,65 поліглобулія (синдроми гіпервіскозності) HbF проти HbA гіпербілірубінемія глюкоза - гіпоглікемія
41 Інтенсивна мас-спектрометрія Що це? Молекули іонізації в конденсованій фазі + + аналіз маси маси заряду Іони в газовій фазі Іони в газовій фазі маса/заряд
42 Інтенсивність Мас-спектр Молекулярний іон з одним зарядом + Молекулярний іон з двома зарядами Аддукція з одним зарядом Концентрація! Молекулярна маса! Маса/заряд
43 43 Тандемний мас-спектрометричний скринінг Технічність, cps Амінокислотний профіль + NL (102.00): Досвід 2, до хв. Від зразка 90 (Зразок279) DataSET4.wiff (Турборозпилювач) e4 8.0e4 7,5e4 7,0e4 6,5e4 6,0 e4 5,5e4 5,0e4 4,5e4 4,0e4 3,5e4 3,0e4 2,5e Макс. 8,4e4 cps. Дефект метаболізму амінокислот фенілкетонурія jávorfaszgenöss betegség (MSUD) тирозинемія I та II аргініносукцинат синтаза та дефіцит ліази гомоцистинурія некетотична дефект циклу сечовини гіперферміцинемія дефект мітокондіальної тканини cps 2.0eeem/z. хв від зразка 90 (Зразок279) DataSET4.wiff (турборозпилювач) Макс. 2.1e4 cps e4 2.0e4 1.9e4 1.8e4 1.7e4 1.6e4 1.5e4 1.4e e4 1.2e4 1.1e4 1.0em/z, аму дефект окислення жирних кислот rövid szénláncú (SCAD) közép szénláncú (mcad) hosszú szénláncú hidroxi-acil (lchad) nagyon hosszú szénláncú (VLCAD) többszörös (MADD vagy GAII) карнітин Пальмітол II ) Органічна ацидурія b-кетотіолаз гіани глютарсаві кислоти (GA-I) ізовалеріансав кислоти (IVA) метилмалонса кислоти (MMA) пропіонсаві кислота (PA) 3-гідрокси-3-метил-глутаріл-КоА-3-гідро-глюазил-3-гідро-АГ-3-гідро-АГ-3-гідро-АГС-3 -CoA karboxiláz hiány (MCC)
44 галактоземія, гіпотиреоз, дефіцит біотинідази, фенілкетонурія, + 22 рідкісні захворювання метаболізму амінокислот, окислення жирних кислот та органічної ацидурії (MS-MS)
45 ПКУ. Вроджені дефекти ферментів
46 Основні обстеження при підозрі на нейрометаболічну хворобу 1. Дослідження матеріалу/параметри Виявлене порушення при ненормальних виявленнях Глюкоза в крові, електроліти Гіпоглікемія, електролітні порушення Лактат, BGA AST, АЛТ, гаммагт, аміачний креатинін, сечовина, амінокислоти сечової кислоти, гомоцитінеїну ацилацетаніна ацилазина Мазок крові (вакуолізовані лімфоцити, акантоцити) енергетичний розлад, ацидоз, алкалозна гепатопатія, нефропатія дефекту циклу сечовини, порушення метаболізму пуринів, порушення білкового обміну, напр. Органоацидопатії Порушення окислення жирних кислот М’язові розлади після судом Нарушення глікозилювання Ерозія зберігання,
47 Основні обстеження при підозрі на нейрометаболічну хворобу 2. Дослідження матеріалу/параметри Доведений розлад у разі відхилень від норми Сеча Кетонові тіла Посилене окиснення жирних кислот (наприклад, під час голодування), порушення розпаду кетонових тіл Органічні кислоти Мукополісахариди, олігосахариди, сіалова кислота, сульфатичні кислоти, сульфатичні кислоти, глюкоза Коефіцієнт ліклу/плазми) Амінокислоти (Коефіцієнт ліклу/плазми) Нейромедіатор Метитетрагідрофолат Дефект транспорту глюкози (GLUT1) Специфікація Аміноацидопатії Розлад нейротрансмісії Церебральний фолат
48 Гемоксигеназа 1. Посилене утворення Hb Гем Білівердін білірубін-альбумін Вільний білірубін Глюкуронілтрансфераз Білівердін редуктаза Некон'югований білірубін + лігандин BDG Новонароджені: умоль/кг/24 год Дорослі умол/кг/24 год 2. Недостатня абсорбція BMG 3. Зниження виведення BMG BDG Некон'югований білірубін 4. Посилення ентеро-печінкової циркуляції
49 Холестаз новонароджених Внутрішньопечінкова хвороба Пошкодження гепатоцитів Пошкодження жовчних шляхів Позапечінкова хвороба: пошкодження жовчних шляхів або перешкода Біліарна атрезія Метаболічна хвороба Вірусна інфекція Внутрішньопечінкова пошкодження жовчних шляхів. Перешкода.
50 Меконій Тимчасова дефекація
51 Дефекація в грудному молоці Ахолічне спорожнення кишечника
53 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в постнатальному періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекції (необхідна клінічна картина + діагностичне обладнання) 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Пухлинні маркери 10. Генетичні можливості діагностики
54 Підозра на зараження. Клінічні симптоми Лихоманка Зміни кровообігу Тахіпное, апное Ціаноз ЦНС Симптоми Млявість Апатія Непритомність Кома Судом Жовтяниця анемія Кровотеча Тромбоцитопенія Олігурія, анурія
55 Інфекційна діагностика Статус сечі Аналіз крові з диференційованим показником крові СРБ, прокальцитонін Мазок із горла Посіви крові Люмбальна пункція Зразок ацетону в сечі ІМП, нефрит, лейкоцитоз, лейкопенія, зміщення вліво,> 15 000/ul, 56 Зміст 1. Загальні коментарі 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в післяпологовому періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
57 ЗАХВОРЮВАННЯ ЕНЗИМОВИМИ ОРГАНАМИ Альфа-амілаза підшлункова залоза, слина Гострий панкреатит 9-18 год Аланінамінотрансфераза (ALT, або GPT) Печінка Знищена паренхіма печінки 50 год Аспартатамінотрансфераза (AST або GOT) Печінка, м'язи, серце Знищена серцева паренхіма -Хвороби лужної фосфатази (ALP) печінка, кістки, нирки, кісткові параметри кісток, холестаз, обструкція жовчовивідних шляхів, гепатобіліарні захворювання 3-7 днів холінестераза (CHE) печінка руйнує паренхіму печінки 10 днів глутаматдегідрогеназа (GLD) печінка Важка хвороба паренхіми печінки h Гамма-глутаміл-трансфераза (GGT) холестаз печінки, обструкція жовчовивідних шляхів, гепато-жовчні захворювання 3-4 дні Лактатдегідрогеназа (ЛДГ) печінка, серце, м’язи, еритроцити, тромбоцити, лімфатичні вузли, хвороба паренхіми печінки, інфаркт міокарда, гемоліз, неефективна ерітра 4-10 год
58 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в постнатальному періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
59 Кров або сироватка сечі Креатинін ООН Креатинін, електроліти глюкози, білок білірубін, UBG, кров Дисоціація між двома параметрами може означати катаболізм Транспортні механізми FE Na = U Na * P Cr P Na * U Cr x100 Мікроскопічне дослідження сечі
60 еритроцитарних гіпсів гемоглобін лейкоцитурія, бактеріурія лейкоцитів
61 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в постнатальному періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
62 Кількість еритроцитів Hb Ht MCV MCH MCHC Найчастіші обстеження Ретикулоцити Сироватка заліза, ферритин, трансферин Кількість лейкоцитів, мазок крові Мазок кісткового мозку Hb електрофорез
63 Лабораторна діагностика мікроцитарної анемії Мазок крові (слідкуйте за клітинами-мішенями, клітинами інфекції) Сироваткове залізо; якщо діагнозу немає, то феритин (трансферин); якщо діагнозу немає, то електрофорез Hb; якщо діагнозу немає, то мазок з кісткового мозку
64 Диференціальна діагностика мікроцитарної анемії Хвороба/критерій залізодефіцитна інфекція/пухлина Клітини-мішені сидеробластичної анемії ні ні ні так MCV/RBZ> 13> 13> 13 65 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в постнатальному періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
66 Існує небагато специфічних для захворювання лабораторних маркерів захворювань шлунково-кишкового тракту. При синдромах мальабсорбції виникає дефект реабсорбції (наприклад, дефіцит заліза). Хронічне запальне кишечник, що корчиться Hb і Fe, зменшується, IgG і СРБ збільшуються, лейкоцитоз із зсувом вліво, тромбоцитоз у калі: кальпротектин специфічний, походить від лейкоцитів) При імунних захворюваннях, таких як целіакія IgA-антитіла проти гліадину IgA-антитіла проти трансглутамінази
67 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в постнатальному періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
68 Найпоширеніші гемато-онкологічні захворювання у дітей 0-4 років 5-9 років Лейкемія Лейкемія Ретинобластома Ретинобластома Нейробластома Нейробластома Пухлина Вільма Пухлини ЦНС Гепатобластома HCC HCC Тератома Пухлини ЦНС Остеосаркома Рабдоміосаркома Евінг саркома пухлини ЦНС Лімфома
69 Найпоширеніші гемато-онкологічні захворювання у дітей 0-4 років 5-9 років Пухлинні маркери Лейкемія Лейкемія Ретинобластома Ретинобластома Нейробластома Нейробластома NSE Пухлина Вільма Лімфома Ходжкіна гепатобластома HCC HCC AFP Тератома Рабдоміосаркома Плазматичні пухлини CarkumNS
70 Зміст 1. Загальні зауваження 2. Пренатальна діагностика 3. Лабораторна діагностика в постнатальному періоді адаптації. Новонароджені 4. Діагностика ЦНС та інфекцій 5. Гепатологія 6. Нефрологія 7. Гематологія 8. Шлунково-кишкові захворювання 9. Маркери пухлини 10. Генетичні можливості діагностики
72 Нормальна картина хромосом
75 Різний розмір (kb) Алель: варіація гена в певному локусі хромосоми Диплоїд: ген в гомологічній хромосомі має дві копії в соматичних клітинах. Мутація Ензимдефековий алель, пов’язаний з фенотипом, може бути як домінантним, так і рецесивним. Домінантний алель працює, коли є лише один алель. Рецесивні алелі можуть працювати лише в парі.
76 SNP: змінена послідовність пар основ. Напр .: AAGCCTA проти AAGCTTA Ця варіація може враховувати SNP, лише якщо вона присутня у 1% населення. SNP з'являється 1 раз на 300 нуклеотидів. В результаті в геномі людини може бути 10 мільйонів SNP. Для чого вони потрібні? 1. Біологічні маркери (дослідження генів). 2. Якщо SNP з’являється в гені або в регуляторній області, близькій до гена, це може змінити продукти гена (білки).
78 Поширені генетичні мутації, виявлені за допомогою GWAS. Джерело: NHGRI Каталог опублікованих GWAS
79 Екзони пов'язані між собою неперекладеними областями (UTR). В геномі людини, cc. 180 000 екзонів. Вони представляють 1% ДНК, 30 мега-основ.
80 секвенування екзома (цільове захоплення екзома, секвенування нового покоління (НГС)). Ефективна стратегія просто для визначення послідовності кодуючих генів. Альтернатива GWAS
81 2 елементи епігенетичного коду ДНК метилаціон. Метильні групи пригнічують активацію гена модифікації гістону.