Panserin C6000, безбілкове середовище для клітин CHO у суспензії, w L-глютамін

  1. Головна/->
  2. Panserin C6000, безбілкове середовище для клітин CHO у суспензії, w: L-глутамін
  • Використовуйте клітини із сироватковою культурою адгезиву (наприклад, DMEM з високим вмістом глюкози з 10% FCS) із log-фази.
  • Видаліть середовище, що містить сироватку, за допомогою піпетки.
  • Промийте газон клітин PBS без Ca, Mg.
  • Покрийте газон клітин трипсином/ЕДТА (0,25%, 0,02%) (приблизно 2 мл на пляшці Т25).
  • Видаліть трипсин приблизно через 1 хв.
  • Інкубація до тих пір, поки клітини не округляться і не відокремлюються від субстрату. (приблизно через 5 хв).
  • Поглинають клітини в DMEM, зупиняють залишкову активність трипсину за допомогою 10% FCS.
  • Клітини центрифугують, відбирають у PBS і знову центрифугують.
  • Візьміть клітини в PBS і визначте кількість клітин. Насіння 5 x 104 - 1 x 105 клітин/мл у попередньо нагрітий Panserin C6000.
  • Використовуйте культуру для культивування суспензії (наприклад, greiner bio-one, код 690 190).
  • Інкубація при інкубаторі при температурі 37 ° C та виділенні 5% СО2.

У перші кілька днів настає фаза відставання, майже не розростається клітина. Приблизно через 7 днів, однак, клітини звикли до безбілкової середовища і збільшились до 1 × 106 клітин/мл.

безбілкове

Переносити клітини на свіже середовище кожні 3-4 дні.

Насіння 3 - 5 х 104 клітин/мл.

Час генерації CHO у Panserin C6000: 16,5 год.